การย้อมสี Kinyoun: รากฐานและเทคนิค

การย้อมสี Kinyoun เป็นเทคนิคการ ย้อมสีที่ ใช้ในการย้อมสีแบคทีเรียและปรสิตที่ทนกรด มันเกิดจากการดัดแปลงสีของ Ziehl-Neelsen เทคนิคทั้งสองถูกตีความในลักษณะเดียวกัน แต่แตกต่างกันในสององค์ประกอบ: ในการเตรียมน้ำยาหลักและเทคนิค Kinyoun ไม่ใช้ความร้อน

ด้วยเหตุนี้จึงเป็นที่รู้จักกันในชื่อ Ziehl-Neelsen หรือ Kinyoun ที่มีการย้อมสีด้วยความเย็น มันถูกระบุสำหรับสีของ Mycobacterium วัณโรค, Micobacterium leprae, mycobacteria ผิดปกติ, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium

เป็นที่น่าสังเกตว่า Nocardias เปื้อนด้วยเทคนิคนี้เล็กน้อยเนื่องจากเป็นแอลกอฮอล์ที่ทนกรดบางส่วนดังนั้นสำหรับประเภทนี้มีการปรับเปลี่ยนวิธีการ

ในทางกลับกันเทคนิคเย็น Kinyoun ได้ถูกรวมเข้ากับเทคนิค trichrome ที่ดัดแปลงโดย Didier สำหรับการตรวจหา coccidia ( Criptosporidium parvum และ Isospora belli ) และสปอร์ของ microsporidia ( Enterocytozoon bieneusi และ Encephalitozoon intestinalis )

มูลนิธิ

น้ำยาย้อมสีหลักคือ carbol fuchsin หรือ fenicaine fuchsin ซึ่งมีคุณสมบัติในการจับกับกรดคาร์โบลิกภายในผนังเซลล์ข้าวเหนียวที่อุดมไปด้วยไขมัน (กรด mycolic) ของเชื้อมัยโคแบคทีเรียและปรสิตบางชนิด

การรวมตัวกันนั้นไม่ได้เกิดจากการลดความเป็นกรด ดังนั้นจุลินทรีย์หมายถึงแอลกอฮอล์ที่ทนกรด

ซึ่งแตกต่างจากเทคนิค Ziehl-Neelsen ซึ่งแก้ไขสีด้วยความร้อนในเทคนิค Kinyoun ขั้นตอนนี้ไม่จำเป็นเนื่องจากสารละลายฟีนอลิกฟูชสินเตรียมสำหรับเทคนิคนี้มีความเข้มข้นสูงของฟีนอล

ฟีนอลละลายวัสดุไขมันของผนังเซลล์ซึ่งช่วยให้การป้อนสีย้อม carbol fuchsin หลังจากที่สีย้อมแทรกซึมมันยังคงอยู่แม้จะล้างด้วยกรดแอลกอฮอล์

ด้วยวิธีนี้จุลินทรีย์ที่ทนกรดใช้กับสีแดงลักษณะในขณะที่ทุกสิ่งที่ไม่ใช่แอลกอฮอล์ทนกรดจะเปลี่ยนสีและสีฟ้า

เทคนิค

วัสดุ

- ดัดแปลงฟีนอลิกฟูเชียน

- แอลกอฮอล์กรด

- Methylene สีน้ำเงิน

การเตรียมการของ Kinyoun fenicated fuchsin

- fuchsin พื้นฐาน: 4 กรัม

- ฟีนอล: 8 มล.

- แอลกอฮอล์ (95%): 20 มล.

- น้ำกลั่น: 100 มล.

ฟิวซินขั้นพื้นฐานในแอลกอฮอล์จะต้องละลายอย่างช้าๆผสมอย่างต่อเนื่อง ต่อจากนั้นฟีนอลที่ตกผลึกจะถูกละลายในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 56 องศาเซลเซียส เมื่อละลายแล้ว 8 มล. จะถูกเพิ่มในสารละลายฟูชสินที่เตรียมไว้ข้างต้น

การเตรียมกรดแอลกอฮอล์

- กรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น: 3 มล.

- เอทานอล (95%): 97 มล.

มันจะต้องถูกวัดเข้าร่วมและผสม

การเตรียมสีย้อมเมทิลีนสีน้ำเงิน

- เมธิลีนสีน้ำเงิน: 0.3 กรัม

- น้ำกลั่น: 100 มล.

มันมีน้ำหนักและละลาย

เทคนิคการย้อมสี Kinyoun

1- เตรียม smear โดยตรงจากตัวอย่างซึ่งอาจเป็นเสมหะของเหลวในปอด, ตะกอนปัสสาวะ, น้ำไขสันหลังหรืออุจจาระกลุ่มอื่น ๆ ; หรือจากการระงับของจุลินทรีย์ที่ได้จากอาณานิคมบริสุทธิ์ที่ปลูกในอาหารเลี้ยงเชื้อ

2- แก้ไข smear ด้วยความร้อน

3- วางรอยเปื้อนบนสะพานระบายสีและปิดบังด้วยน้ำยาฟีนอลฟินซินของ Kinyoun ให้มันพักเป็นเวลา 3 หรือ 5 นาที

4- ล้างด้วยน้ำกลั่น

5- ฟอกขาวด้วยแอลกอฮอล์กรดเป็นเวลา 3 นาทีแล้วล้างอีกครั้งด้วยน้ำกลั่น

6 - ฟอกขาวอีกครั้งด้วยกรดแอลกอฮอล์เป็นเวลา 1 หรือ 2 นาทีจนกว่าจะไม่มีการย้อมอีกต่อไป

7- ล้างด้วยน้ำกลั่นและปล่อยให้ระบายวางสไลด์ในตำแหน่งแนวตั้ง

8- ปิดการเตรียมด้วยเมทิลีนบลูและทิ้งไว้ 4 นาที

9- ล้างด้วยน้ำกลั่นและปล่อยให้อากาศแห้ง

10- ตรวจสอบที่ 40X และที่ 100X

ถ้าคุณต้องการที่จะปรับปรุงและเร่งการย้อมสีของจุลินทรีย์ที่เป็นกรดอย่างรวดเร็วให้เพิ่มตัวแทนหยดน้ำ 1 หยด (เช่น tergitol หมายเลข 7) เป็น 30 หรือ 40 มล. ของ Finys Finys กรดคินหน์

ห้องแล็บบางแห่งเปลี่ยนสีย้อมเมทิลีนสีน้ำเงินเพื่อให้ได้สีเขียวสดใสหรือกรด picric ครั้งแรกให้สีเขียวกับพื้นหลังและที่สองสร้างสีเหลือง

เทคนิค Kinyoun พิเศษสำหรับ Nocardias

เพื่อปรับปรุงการย้อมสีของแบคทีเรีย Nocardia จึงใช้การย้อมสี Kinyoun เทคนิคดังต่อไปนี้:

1- ปกปิดรอยเปื้อนด้วย Finys Kinyoun ฟีนอลเป็นเวลา 3 นาที

2- ล้างด้วยน้ำกลั่น

3- ปัดแก้มสั้น ๆ ด้วยแอลกอฮอล์ที่เป็นกรด 3% จนกระทั่งไม่มีสีย้อมติดอีก

4- ล้างอีกครั้งด้วยน้ำกลั่น

5- ปิดการเตรียมด้วยเมทิลีนบลูและทิ้งไว้ 30 วินาที

6- ล้างด้วยน้ำกลั่นและปล่อยให้อากาศแห้ง

เทคนิคผสมผสานของฟีนอลิกและฟิชชิคฟิชชินดัดแปลงโดยดิดิเยร์

เทคนิคนี้เหมาะสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างอุจจาระในการค้นหา coccidia และสปอร์ของ Microsporidium sp ในเวลาเดียวกัน ขั้นตอนที่ต้องปฏิบัติตามมีดังนี้:

1- ปกปิดรอยเปื้อนด้วย Kinyoun phenolic fuchsin เป็นเวลา 10 นาที

2- เอาสีย้อมและล้างด้วยน้ำกลั่น

สารฟอกขาวเป็นเวลา 30 วินาทีด้วยกรดไฮโดรคลอริกแอลกอฮอล์

4- ล้างอีกครั้งด้วยน้ำกลั่น

5- ปกคลุม smear ด้วยสารละลายไตรคลอร์มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 ° C

6- ล้างด้วยน้ำกลั่น

7- ลดสีเป็นเวลา 10 วินาทีด้วยกรดอะซิติกแอลกอฮอล์

8- ล้าง smear เป็นเวลา 30 วินาทีโดยใช้ 95% เอทานอล

การควบคุมคุณภาพ

ในการควบคุมเชิงบวกนั้นรอยเปื้อนจะถูกเตรียมด้วย เชื้อ Mycobacterium tuberculosis และย้อมด้วยรีเอเจนต์ที่เตรียมไว้เพื่อตรวจสอบว่าแบคทีเรียใช้สีที่เหมาะสม (แดง - แดง)

นอกจากนี้ยังสามารถใช้การควบคุมเชิงลบได้โดยการเตรียมรอยเปื้อนด้วยสายพันธุ์ที่ไม่เป็นกรดทนแอลกอฮอล์จึงตรวจสอบว่าตัวอย่างทั้งหมดใช้สีของความคมชัด

เทคนิค Kinyoun เปรียบเทียบกับเทคนิค Ziehl -Neelsen

เทคนิค Kinyoun นั้นง่ายกว่าเพราะจะช่วยลดขั้นตอนการให้ความร้อน แต่ข้อดีหลักของมันคือช่วยป้องกันการปล่อยไอระเหยของสารพิษและก่อให้เกิดมะเร็งในระยะยาว ดังนั้นการย้อมสี Kinyoun จึงปลอดภัยสำหรับบุคลากรที่รับผิดชอบการย้อมสี

มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะต้องคำนึงถึงว่ามันเป็นสิ่งจำเป็นที่จะต้องดูแลว่ารีเอเจนต์ไม่ได้สัมผัสโดยตรงกับผิวหนังในขณะที่พวกเขามีการกัดกร่อนและสารฟอกขาวไวไฟ

เกี่ยวกับข้อเสีย, การละเลงเชิงลบไม่จำเป็นต้องระบุว่าจุลินทรีย์ไม่ปรากฏขึ้น นอกจากนี้การมีเซลล์ของเศษซากสามารถทำให้เกิดผลบวกปลอมซึ่งสร้างความสับสนในการวินิจฉัย

การอ้างอิง

1. เคมีประยุกต์คลินิก (2016) Kit BK Kinyoun มีจำหน่ายที่: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel Kinyoun เปื้อนและสอง Coccidia ในเอชไอวี วารสารการแพทย์ ปี 2011 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยาของ Bailey & Scott 12 เอ็ด อาร์เจนตินา บรรณาธิการ Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004) การวินิจฉัยทางจุลชีววิทยา (ฉบับที่ 5) อาร์เจนตินา, บรรณาธิการ Panamericana SA
5. ผู้มีส่วนร่วมใน Wikipedia « Kinyoun stain. » Wikipedia, สารานุกรมเสรี Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8 ก.พ. 2018 เว็บ 5 ม.ค. 2019
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. การนำเทคนิคการใช้สีมาใช้ในการตรวจวินิจฉัย Coccidia และ Microsporidia พร้อมกัน สถาบันสุขอนามัยของมหาวิทยาลัยแห่งสาธารณรัฐ มอนเตวิเด อุรุกวัย มีจำหน่ายที่: higiene.edu.uy